Skip to Main Content

Projekty badawcze w sieci VIA CARPATIA

Szczegóły projektu badawczego

Numer umowy
2021/05/X/NZ7/00433
Wykonawcy badań/ podległość
Wydział Budownictwa i Nauk o Środowisku
Tytuł
Wybrane fungicydy jako potencjalne mikrozanieczyszczenia estrogeniczne EDC w środowisku
Streszczenie
Ze względu na powszechne stosowanie fungicydów w rolnictwie ich pozostałości mogą być wykrywane w wielu gatunkach roślin pozyskiwanych z różnych rodzajów upraw. Ludzie poprzez konsumpcję surowych owoców, warzyw oraz produktów zbożowych są coraz bardziej eksponowani na działanie tych substancji czynnych. Na podstawie badań własnych stwierdzono, że herbicydy, które również są opisywane jako bezpieczne dla człowieka środki ochrony roślin, wykazywały potencjał zarówno kancerogenny jak i estrogenny. Stanowiało to podstawę do zaprojektowania eksperymentu, którego celem jest zbadanie potencjalnie estrogennego działania wybranych fungicydów. Zaplanowane badania będą miały charakter badań wstępnych, a celem ich jest sprawdzenie działania substancji czynnych wybranych fungicydów: boskalidu, cyprodinilu i iprodionu na komórki estrogeno- zależne (ER+) raka sutka linii MCF-7 oraz na komórki linii T47D-KBluc. Komórki wyselekcjonowano pod kątem odpowiedzi na 17-beta-estradiol. Mogą być one używane do badania substancji chemicznych pod kątem ich aktywności estrogenowej lub antyestrogennej. Kontrolą pozytywną będzie hodowla z 17β-estradiolem, który jest związkiem powszechnie stosowanym w badaniach substancji o działaniu potencjalnie zaburzającym gospodarkę hormonalną u kobiet. Przeprowadzone zostaną też badania cytotoksyczności analizowanych pestycydów w zakresie stężeń 10nmol – 10.000nmol z jednoczesnym zastosowaniem Tamoksyfenu (w stężeniu 100nmol) jako czynnika blokującego jądrowe receptory estrogenowe (ERα). Tamoksyfen jest syntetycznym lekiem o działaniu antyestrogenowym, stosowanym głównie w terapii raka sutka (ER+). Badania cytotoksyczności wybranych fungicydów (w zakresie stężeń 10nmol – 10.000nmol) zostaną wykonane na liniach komórek raka sutka: MCF-7 i T47D-KBluc. Komórki linii MCF-7 oraz T47D-KBluc będą inkubowane w medium bez antybiotyków i bez czerwieni fenolowej, która jest czynnikiem aktywującym receptor ERα, tak aby wykluczyć jej ewentualne oddziaływanie z receptorami estrogenowymi komórek oraz z zastosowaniem surowicy pozbawionej estrogenów poprzez traktowanie jej czynnikami adsorbującymi (węgiel aktywny/dializa). Ocena aktywności cytotoksycznej badanych fungicydów zostanie wykonana z wykorzystaniem testu MTT na dwóch liniach komórkowych. Zostanie wykonany test genu reporterowego receptora estrogenowego (ER), który określany jako test T47D- KBluc i jest użyteczną metodą wykrywania aktywności estrogenowej zarówno pojedynczych związków jak i ich mieszanin. Komórki będą eksponowane na badane związki oraz 17-β-estradiol (E2). Zostanie zmierzona aktywność lucyferazy przy użyciu czytnika płytek z funkcją luminescencji. Uzyskane wyniki zostaną porównane za pomocą wybranych metod statystycznych (analiza wariancji, dendrogram). Test E-Screen zostanie wykonany na linii MCF-7. Jest to test oparty na zwiększonej proliferacji ludzkich komórek raka piersi (MCF-7) w obecności substancji o działaniu estrogennym. Jest to narzędzie do szybkiej oceny aktywności estrogenowej potencjalnych ksenoestrogenów (pojedynczych związków oraz mieszanin). Wyniki uzyskane w efekcie realizacji projektu pozwolą odpowiedzieć na pytanie czy badane związki są modulatorami hormonalnymi potencjalnie niebezpiecznymi dla ludzi, działającymi poprzez wiązanie się z receptorem ERα.
Program
MINIATURA
Uczelnia
Politechnika Białostocka
Slowa Kluczowe
cytotoksyczność; fungicydy; rak sutka; związki endokrynnie czynne